Бактериальная масса

Приготовляют три реактива: 1) М 15 фосфатный буфер рН 7,0-100 мл, 2) твин-80-0,5 мл, 3) 0,1% водный раствор основного нейтрального красного — 2 мл. При приготовлении последнего реактива Н. М. Макаревич рекомендует растворять краску не в 100 мл, а в 85 мл дистиллированной воды. Эти три реактива смешивают, разливают по 4 мл в пробирки, автоклавируют 15 минут при 120°, проверяют на стерильность в термостате и хранят не более 2 недель в холодильнике. При постановке опыта в пробирку с реактивами вносят изучаемую культуру (3 платиновых лопаточки). Пробирку ставят в термостат. Реакцию проверяют через 4 часа, на 5-й и на 10-й день. При энзимном гидролизе твина-80 освобождается и восстанавливается окраска (от розовой до красной). Кислотоупорные сапрофиты обычно в течение нескольких часов разрушают твин-80. Положительную реакцию дают М. aquae (в отличие от М. scrofuloceum). В III группе отрицательную реакцию дают М. avium, М. Battey, М. xenopei. Определение активности окислительно-восстановительных ферментов по Bloch в модификации Н. М. Макаревич. Смешивают 1 мл 1% раствора глюкозы и 0,1 мл 0,02о/0 метиленового синего с 1 мл суспензии в фосфорном буфере (рН 7,4-7,6) микобактерии туберкулеза. На перемешенное содержимое пробирки для задержки доступа воздуха наслаивают вазелиновое масло. В контрольной пробирке-суспензия микобактерии и метиленовый синий без глюкозы. При регистрации результатов учитывается окраска в нижних 3/4 содержимого пробирки. Bloch (1950) установил, что между дегидрогеназной активностью и вирулентностью микобактерии имеется связь, и реакция определения активности дегидрогеназы способствует дифференциации вирулентных микобактерии туберкулеза от кислотоупорных сапрофитов. Последние обесцвечивают метиленовый синий в первые 30 минут, вирулентные туберкулезные микобактерии — в течение 6-12 часов.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *